三酰甘油氧化聚合甘油的檢測(cè)、評(píng)價(jià)及應(yīng)用

三酰甘油氧化聚合甘油（Oxidized triacylglycerol polymers，TGP）是油脂氧化過(guò)程中發(fā)生的一類極其復(fù)雜的深度氧化產(chǎn)品，在油脂的加工、貯藏、運(yùn)用過(guò)程中TGP總量持續(xù)遞加，經(jīng)再次常規(guī)精粹也不衰減，是一個(gè)可以客觀表征油脂氧化程度的內(nèi)源性目標(biāo)。本文針對(duì)現(xiàn)在油脂氧化目標(biāo)存在的缺點(diǎn)和高靈敏度TGP測(cè)定的規(guī)范技能缺失等問(wèn)題，展開了TGP與油脂氧化關(guān)聯(lián)性及其在油脂質(zhì)量點(diǎn)評(píng)中應(yīng)用的相關(guān)研討，首要研討內(nèi)容如下： 1、TGP的制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測(cè)辦法研討。選用制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜（PFC-HPSEC）技能，研討樹立了一種適于檢測(cè)冷榨油和精粹食用植物油等低含量TGP（小于3%）油脂的檢測(cè)辦法，用中壓Flash柱預(yù)別離油脂極性組分，經(jīng)高效體積排阻色譜細(xì)分TGO、TGD、ox-TG、DG、FFA等組分，用聚苯乙烯規(guī)范相對(duì)分子量定性，根據(jù)分量法測(cè)定油脂極性組分含量及高效體積排阻色譜面積歸一法定量油脂中TGO和氧化三酰甘油二聚物（TGD）百分含量，結(jié)果表明：TGO和TGD2別離在28-1800mg/L、11-2800mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系杰出，相關(guān)系數(shù)（R）均高于0.99，TGO及TGD的最低檢測(cè)限別離為28mg/L、11mg/L，定量下限別離為113mg/L、44mg/L；相當(dāng)于油脂中TGP的最低檢測(cè)限為0.01%(100μg/g)。制備型快速柱層析的3個(gè)極性組分加標(biāo)水平的均勻回收率為95%-98%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測(cè)油脂TGP的重復(fù)性RSD均小于10%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜辦法與經(jīng)典的硅膠柱-高效體積排阻色譜辦法在定量油脂TGP的相對(duì)誤差低于8.9%。 2、TGP與油脂氧化程度關(guān)聯(lián)性研討。選用高效體積排阻色譜（HPSEC）技能，對(duì)食用植物油室溫貯藏氧化、Schaal烘箱法加速氧化、高溫煎炸氧化等三種油脂氧化過(guò)程中發(fā)生的極性組分（PCs）及其細(xì)分組分進(jìn)行了比較剖析，一起監(jiān)測(cè)了油脂氧化過(guò)程中內(nèi)源性天然抗氧化劑VE的含量改變，樹立TGP與油脂氧化程度關(guān)聯(lián)性，結(jié)果表明：氧化三酰甘油（ox-TG）的量與誘導(dǎo)期出現(xiàn)杰出的線性關(guān)系。氧化三酰甘油寡聚物（TGO）的出現(xiàn)及內(nèi)源性天然抗氧化劑VE的耗盡標(biāo)志誘導(dǎo)期完畢的。TGO基本都是氧化三酰甘油的三聚體，估測(cè)首要是含環(huán)氧基、酮基、醛基、C-C鍵橋、C-O-C鍵橋的甘油酯。ln(TGO/TGO0)與大豆油氧化程度成線性關(guān)系。 3、TGP的凝膠浸透色譜色譜制備與穩(wěn)定性研討。選用制備型快速柱層析聯(lián)用高壓凝膠浸透色譜技能，從油脂極性組分制備mg量級(jí)TGO和TGD，調(diào)查了TGP的二聚體和寡聚體在多種物理狀態(tài)與貯藏條件下的穩(wěn)定性，用高效體積排阻色譜測(cè)定了極性組分各相關(guān)組分的分子量，結(jié)果表明：高壓凝膠浸透色譜制備TGP的優(yōu)化條件為：選用三級(jí)串聯(lián)凝膠浸透色譜柱標(biāo)準(zhǔn)Waters UltrastyragelTMLinear四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM500四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM100四氫呋喃柱（19mm×300mm），上樣量500ul，活動(dòng)相四氫呋喃，流速4.2mL/min，TGO、TGD的搜集時(shí)刻別離為29.00-32.10min、32.25-33.50min。以油脂極性組分為質(zhì)料的高壓凝膠浸透色譜制備TGP周期約為1h，單次別離獲得0.49mgTGD與0.23mgTGO，純度均在99%以上，TGD與TGO得率別離為29%和13%。TGD與TGO的凝膠浸透色譜制品適宜在四氫呋喃溶液穩(wěn)定貯藏，-20℃至20℃各溫度條件下60d******衰減均低于3%，TGP固體即使-20℃保存60d也衰減10%，在25℃室溫下運(yùn)用不應(yīng)超過(guò)6h。極性組分中TGO、TGD、ox-TG、DG的分子量（Mw）別離為2469、1728、908、510，TGO以三聚體為主。 4、TGP的細(xì)胞毒性點(diǎn)評(píng)。研討了不同TGP濃度對(duì)巨噬細(xì)胞Ana-1的作用，選用倒置相差鏡調(diào)查細(xì)胞生長(zhǎng)，噻唑藍(lán)（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞增殖才能，激光共聚集鏡觀測(cè)細(xì)胞凋亡，酶標(biāo)定量胞外乳酸脫氫酶，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胞內(nèi)活性氧（ROS），結(jié)果表明：50μg/mL濃度的TGP致細(xì)胞顯著損傷，該濃度下的巨噬細(xì)胞在倒置相差顯微鏡下存活率顯著下降、增殖才能遭到明顯抑制、吞噬中性紅的才能明顯下降、乳酸脫氫酶釋放量明顯上升，細(xì)胞前期凋亡顯著?；钚匝踹^(guò)度發(fā)生是TGP致細(xì)胞損傷的首要原因之一。TGD與TGO細(xì)胞毒性差異不顯著，支撐Billek的油脂TGP低吸收率的定論，尚不能確定與惡性腫瘤相關(guān)性。 5、基于TGP的油脂質(zhì)量點(diǎn)評(píng)應(yīng)用。展開了基于TGP的地溝油檢測(cè)、冷榨油鑒別和煎炸油質(zhì)量操控、毛油質(zhì)量點(diǎn)評(píng)等應(yīng)用研討。比較剖析食用植物油與地溝油兩大樣本庫(kù)的TGP，定論如下：12種常見食用植物油41個(gè)樣本TGP含量0.69±0.41，3類典型地溝油64個(gè)樣本TGP含量6.01±3.44，差異極其明顯，據(jù)此可以一定程度精確鑒別地溝油；冷榨油具低TGP特征可明顯差異于精粹油；煎炸油中TGP與PCs線性相關(guān)，TGP直接指示煎炸油質(zhì)量；毛油的TGP反映其新鮮程度。TGP在油脂質(zhì)量點(diǎn)評(píng)中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)，依賴于分類油脂的TGP基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)。